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    次氯酸鈣金黃色pu萄球菌滅活效果檢測技術(shù)規(guī)范與方法優(yōu)化研究

    發(fā)布時間: 2025-09-30  點(diǎn)擊次數(shù): 193次

    次氯酸鈣金黃色pu萄球菌滅活效果檢測技術(shù)規(guī)范與方法優(yōu)化研究  

    一、檢測原理與標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)  

    (一)殺菌機(jī)制  

    次氯酸鈣溶于水釋放次氯酸(HClO),通過以下途徑殺滅金黃色pu萄球菌(StaphylococcusaureusATCC6538):  

    1.細(xì)胞膜破壞:HClO穿透細(xì)胞壁,氧化磷脂雙分子層;  

    2.蛋白質(zhì)變性:與酶活性中心巰基(-SH)反應(yīng),抑制代謝酶活性;  

    3.DNA損傷:破壞核酸結(jié)構(gòu),阻止細(xì)胞復(fù)制1。  

    (二)標(biāo)準(zhǔn)方法  

    國標(biāo):GB/T27954-2020《消毒劑衛(wèi)生要求》懸液定量殺滅試驗(yàn);  

    國際標(biāo)準(zhǔn):EN13704《化學(xué)消毒劑和防腐劑食品、工業(yè)、家庭和公共區(qū)域用化學(xué)消毒劑殺菌活性評價》2。  

    二、試驗(yàn)材料與試劑配制  

    (一)菌株與培養(yǎng)基  

    1.標(biāo)準(zhǔn)菌株:金黃色pu萄球菌ATCC6538,由中國普通微生物菌種保藏中心提供;  

    2.培養(yǎng)基:營養(yǎng)瓊脂(NA),pH7.0±0.2,121℃滅菌20分鐘1。  

    (二)關(guān)鍵試劑  

    1. 次氯酸鈣溶液:  

    母液:稱取0.5g次氯酸鈣(有效氯65%),用無菌水溶解定容至100mL,有效氯濃度3250mg/L;  

    工作液:用PBS稀釋至500mg/L(按殺滅要求調(diào)整)3。    

    中和劑:  

    0.1%硫代liu酸鈉(Na?S?O?)溶液,中和有效氯至<0.1mg/L1。  

    三、試驗(yàn)流程與操作規(guī)范  

    (一)菌懸液制備  

    1.活化培養(yǎng):  

    將凍干菌種接種至NA斜面,37℃培養(yǎng)18-24小時;  

    挑取單菌落轉(zhuǎn)接至營養(yǎng)肉湯,37℃振蕩培養(yǎng)6小時(對數(shù)生長期)。   

    稀釋與干擾物添加:  

    用0.03mol/LPBS(含10%小牛血清)稀釋菌液至1×10?CFU/mL;  

    混勻后備用,2小時內(nèi)使用2。  

    (二)殺滅試驗(yàn)步驟  

    樣品處理:  

    取5mL次氯酸鈣工作液(500mg/L)至滅菌試管,37℃水浴預(yù)熱5分鐘;  

    加入5mL菌懸液(1×10?CFU/mL),立即計時并混勻。    

    作用與終止:  

    20℃±1℃避光作用10分鐘(按產(chǎn)品說明書調(diào)整作用時間);  

    取1.0mL混合液至9.0mL中和劑,混勻后靜置10分鐘1。   

    培養(yǎng)與計數(shù):    

    取中和后液體1.0mL,用PBS梯度稀釋(10?1-10?3);  

    各稀釋度取0.5mL傾注NA平板,37℃培養(yǎng)48小時,計數(shù)菌落數(shù)(CFU)2。  

    (三)對照組設(shè)置  

    對照組類型操作步驟作用  

    陽性對照組菌懸液+PBS(不加消毒劑)驗(yàn)證菌活性  

    陰性對照組中和劑+培養(yǎng)基驗(yàn)證無菌操作  

    中和劑對照組消毒劑+中和劑+菌懸液驗(yàn)證中和劑有效性  

    四、結(jié)果計算與判定標(biāo)準(zhǔn)  

    (一)殺滅率計算  

    殺滅率()  

    符號說明:  

    試驗(yàn)組活菌數(shù)(CFU/mL);  

    陽性對照組活菌數(shù)(CFU/mL)1。  

    (二)判定標(biāo)準(zhǔn)  

    產(chǎn)品類型作用時間(min)有效氯濃度(mg/L)殺滅率要求(%)  

    物體表面消毒劑10500≥99.99  

    手消毒劑1.51000≥99.999  

    五、影響因素與優(yōu)化策略  

    (一)關(guān)鍵因素控制  

    因素優(yōu)化條件效果  

    有效氯濃度500-1000mg/L(根據(jù)有機(jī)物調(diào)整)殺滅率提升至99.99%  

    作用pH6.5-7.5(中性條件)HClO占比達(dá)80%以上  

    溫度20-25℃溫度每升高10℃,殺滅時間縮短一半  

    (二)常見問題解決方案  

    問題現(xiàn)象原因分析解決措施  

    殺滅率偏低有效氯濃度不足或中和劑過量重新標(biāo)定濃度,調(diào)整中和劑用量至9mL  

    菌落蔓延菌懸液濃度過高增加稀釋梯度至10??  

    中和劑失效硫代liu酸鈉氧化使用新鮮配制的中和劑  

    六、質(zhì)量控制與應(yīng)用場景  

    (一)質(zhì)控指標(biāo)  

    1.菌懸液濃度:1×10?±0.5×10?CFU/mL;  

    2.中和劑有效性:中和后殘留菌數(shù)≤10CFU/mL2。  

    (二)典型應(yīng)用  

    1.醫(yī)療環(huán)境表面:物體表面擦拭后殺滅率≥99.99%;  

    2.食品加工設(shè)備:消毒后金黃色pu萄球菌殘留≤10CFU/cm21。  

    關(guān)鍵詞:次氯酸鈣;金黃色pu萄球菌;殺滅率;懸液定量試驗(yàn);GB/T27954  

    參考文獻(xiàn)  

    [1]GB/T27954-2020消毒劑衛(wèi)生要求[S].  

    [2]EN13704化學(xué)消毒劑殺菌活性評價[S].  

    [3]WHO飲用水消毒指南[S].  

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